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施一公團隊解析出超復(fù)雜蛋白結(jié)構(gòu)

  • 2018年8月14日 FanTianQing來源:新浪網(wǎng) 1412 93
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8月10日,《科學(xué)》雜志在線刊發(fā)施一公團隊研究成果,首次解析了人源多囊蛋白1與多囊蛋白2形成的復(fù)合物的結(jié)構(gòu),分辨率達(dá)到3.6Å(埃,相當(dāng)于10-10米)。

施一公團隊解析出超復(fù)雜蛋白結(jié)構(gòu),助力多囊腎病機制研究。

8月10日,《科學(xué)》雜志在線刊發(fā)施一公團隊研究成果,首次解析了人源多囊蛋白1與多囊蛋白2形成的復(fù)合物的結(jié)構(gòu),分辨率達(dá)到3.6?(埃,相當(dāng)于10-10米)。

人體內(nèi)多囊蛋白的突變會引發(fā)多囊腎病,每千人中大約有1—2.5人患病,算比較常見。2003年一篇題為《常染色體顯性遺傳性多囊腎病研究的熱點問題》的論文中顯示,該病的研究熱點在于致病基因表達(dá)產(chǎn)物,即多囊蛋白1和多囊蛋白2的結(jié)構(gòu)與功能、亞細(xì)胞定位等,這樣可闡明多囊腎病的分子發(fā)病機制,有望實現(xiàn)臨床徹底治愈。

15年后,該蛋白家族的精細(xì)結(jié)構(gòu)終于解出,完成“忘年問答”。識得該蛋白家族的“廬山真面目”難在多囊蛋白1擁有4302個氨基酸,包含11次跨膜螺旋,是一個超復(fù)雜的蛋白;同時多囊蛋白1與多囊蛋白2還會復(fù)合,增加了結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。

(圖片與新聞無關(guān))

系統(tǒng)摸索,獲得足夠的測試用量

“解析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的第一步是獲得足夠量且性質(zhì)均一的蛋白質(zhì)?!?月11日,論文作者之一的王廷亮博士告訴記者,“上鏡”前的準(zhǔn)備工作耗時5年。

對于結(jié)構(gòu)生物學(xué)家來說,測試蛋白經(jīng)常在量上“捉襟見肘”。蛋白質(zhì)為人源蛋白,很難直接從人體組織中富集提取而出。研究團隊通過已知的基因序列將基因在原核生物中(例如大腸桿菌)進行克隆,獲得大量基因拷貝后,通過病毒侵染的方法轉(zhuǎn)入到常用的工具細(xì)胞中進行表達(dá),富集目標(biāo)蛋白質(zhì)。

為了讓外來基因在“新環(huán)境”中表達(dá),研究組進行大量重復(fù)性工作,為目標(biāo)基因(PKD1和PKD2)尋找最優(yōu)的表達(dá)系統(tǒng)?!叭缤ㄟ^基因編碼的優(yōu)化,可提高蛋白的表達(dá)量,從而拿到體外重組蛋白質(zhì)?!蓖跬⒘琳f。

此時,目標(biāo)蛋白仍舊在細(xì)胞中,下一步是將目標(biāo)蛋白從復(fù)雜的細(xì)胞中“釣”出來。大量的提取條件摸索,如嘗試和篩選了大量的去垢劑、確定蛋白邊界等,才能形成“不錯殺一個、不漏網(wǎng)一千”的數(shù)量和質(zhì)量上的平衡。最終,課題組獲得了珍貴稀少的目標(biāo)蛋白?!?0升的細(xì)胞只能提取出100微克左右蛋白,只夠完成3—5次‘上鏡’制備,符合電鏡數(shù)據(jù)收集要求的樣品往往只有1到2個?!蓖跬⒘琳f。

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